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正交试验法优化淫黄颗粒的提取工艺

来源:www.jianzhi8.com发布时间:2012-06-04 浏览:1464次

【摘要】[目的]优化淫黄颗粒的提取工艺。[方法]采用正交试验法,以提取液中淫羊藿苷的含量为考察指标,对影响水煎提取效果的加水量、浸泡时间、煎煮时间、次数等4个因素进行研究。[结果]淫黄颗粒的最佳提取工艺为A2B2C3,即加水量为8倍,提取3次,每次1.5h。[结论]该实验所优选的工艺稳定,可行。
 【关键词】 淫黄颗粒 总黄酮 淫羊藿苷 提取工艺 正交试验
   Abstract:[Objective]Optimise the extract technical of Yinhuang Granules. [Method] Take orthogonal test, take carriin content in extract as observation index, study the 4 factors of water amount, sipping time, decocting time and times influencing the decoction extract result. [Result] The best extract technical is A2B2C3, i.e. 8 times for water, 3 times of extract, 1.5h/time.[Conclusion] The experiment shows the technical is stable and available.
   Key words:Yinhuang Granules;total flavones;icariin;extract technical;orthogonal test
   淫黄颗粒系以淫羊藿为君,配伍黄芪而制成的中药复方制剂,具有补气健肾之功效,主要用于肾病综合征的治疗。为确保该制剂的临床疗效,本文采用正交设计方法,以干膏收率和总黄酮提取率为指标,对淫黄颗粒水提取工艺进行优化研究。
   1 仪器与材料
   TU?1800PC型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。淫羊藿苷对照品(供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所,批号:110737?200312。药材购于杭州康佳医药有限公司,经鉴定符合《中国药典》2005版(二部)[1]规定。
   2 方法与结果
   2.1 正交试验设计
   选用L9(34)正交表,以干膏收率和总黄酮提取率为考核指标,考察水提取中的加水量(A)、煎煮时间(B)和煎煮次数(C)三个因素,每个因素设三水平。其因素水平见表1。表1 正交试验因素水平表(略)
   2.2 样品提取液的制备
   按处方配比称取药材适量,按正交试验表进行水提取,药液经滤纸滤过,滤液浓缩至1∶2(药材∶药液),备用。
   2.3 干膏收率的测定
   精密量取上述提取液50ml,浓缩至一定体积,移置于已干燥恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥至恒重,计算干浸膏收率。结果见表2。
   2.4 总黄酮含量的测定
   2.4.1 对照品溶液的制备
   精密称取淫羊藿苷对照品10.0mg,置25ml容量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得(每ml含淫羊藿苷0.4mg)。
   2.4.2 测定波长的选择
   精密量取上述对照品溶液0.6ml,置10ml容量瓶中,加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0ml,混匀,加甲醇稀释至刻度,摇匀,于70℃恒温水浴中加热10min,取出后室温放冷。用TU?1800型紫外可见分光光度计,于400~700nm波长范围内扫描,于412.0nm波长处有最大吸收,故选择412.0nm为测定波长。
   2.4.3 标准曲线的制备
   精密量取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml,分别置10ml容量瓶中,各加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0ml,混匀,加甲醇稀释至刻度,摇匀,于70℃恒温水浴中放置10min,取出后室温放冷,于412.0nm的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线(图1),(得标准曲线:y=0.0125c+0.0068(r=0.9999)。淫羊藿苷在7.84~54.88mg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。
   2.4.4 重现性试验
   精密量取同一批提取液6份,按含量测定方法制备,并按标准曲线法测定吸收度,RSD=0.94%,重现性良好。
   2.4.5 加样回收率试验
   取已知含量的提取液6份,加入不同量的淫羊藿苷对照品,按含量测定方法制备,并按标准曲线法测定吸收度,计算加样回收率,结果见表3。平均回收率为101.12%,RSD=0.85%表3 回收率试验结果(略)
   2.4.6 含量测定
   精密量取正交试验提取液1ml,置蒸发皿中,水浴上蒸干后,残渣加甲醇溶解,移入10ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密吸取样品溶液2ml,置10ml容量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加0.1mol/L三氯化铝溶液1.0ml”起依法测定吸收度,根据标准曲线计算黄酮含量和总黄酮提取总量,结果见表2。
 表2 正交试验设计及干膏收率和总黄酮提取率(略)
   2.5 结果分析
   正交试验结果进行方差分析,结果见表4和表5。以干浸膏得率为考察指标,表3~2中极差R值大小显示,各因素作用主次为C>B>A;方差分析结果表明:C因素的影响有极显著性差异(P<0.05),A因素和B因素则均无显著性影响(P>0.05),以A3B2C3组合为佳。以总黄酮提取率为考察指标,表3~2中极差R值大小显示,各因素作用主次为C>A>B;方差分析结果表明:A因素和B因素的影响无显著性差异(P>0.05),而C因素的影响有显著性差异(P<0.05),以A2B3C3组合为佳。表4 浸膏得率方差分析表(略)表5 总黄酮提取率方差分析表(略)
   2.6 验证试验
   考虑到总黄酮提取率这一指标较重要,同时兼顾省时节能,故拟确定水提取工艺为:A2B2C3。但从表3、5可见,提取次数对总黄酮提取率影响较大,故进一步比较A2B2C3和A2B2C4。取同一批药材,根据处方比例称取药材,按A2B2C4和A2B2C3进行对比验证试验,按上述方法测定浸膏得率及总黄酮含量,结果见表6。表6 验证试验结果(略)
   由表6可见,以浸膏得率及总黄酮提取率为指标,按A2B2C3和A2B2C4进行试验,结果显示两者几无差别,故确定水提取工艺为A2B2C3,即加水量为8倍,提取3次,每次1.5h。
   3 讨论
   方中君药淫羊藿具有补肾阳、 强筋骨、祛风湿功效,其主要有效成分是淫羊藿苷和淫羊藿次苷等黄酮类化合物。黄芪为方中辅药,具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托毒排脓、敛疮生肌之功效,含皂苷类、多糖类、黄酮类及氨基酸类等,其中皂苷和多糖类被认为系主要有效成份。根据方中各药的有效成分及其溶解性能,设计确定采用水提工艺。
   淫黄颗粒系复方制剂,成分复杂。因此,除以干膏收率为考核指标外,同时选择以淫羊藿苷为对照品,测定总黄酮的含量,以综合评价工艺的合理性。结果显示,本方法简便、准确、灵敏,重现性及回收率均符合要求。
   致谢:本文承蒙硕士生导师孙红祥副教授大力协助,在此深表感谢!
 【参考文献】
   [1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].2005版,北京:化学工业出版社,2005.
   [2]黄秀兰,周亚伟,王伟.淫羊藿黄酮类化合物药理研究进展[J].中成药,2005,27(6):719

 

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